FISH діагностика

Принцип FISH методу (флуоресцентної гібридизації in situ)

• використовуються короткі послідовності ДНК, звані зондами, які є комплементарними по відношенню до послідовностей ДНК, що представляє об’єкт вивчення
• зонди зв’язуються з комплементарними ділянками ДНК і завдяки тому, що вони позначені флуоресцентною міткою, дозволяють визначити наявність (кількість) хромосом / ділянок конкретних хромосом.

При проведенні FISH аналізу сперми використовуються ДНК-зонди:

• локус-специфічні – дозволяють ідентифікувати певні ділянки конкретної хромосоми,
• центромерного – специфічно зв’язуються з альфасателітнимі ділянками досліджуваних хромосом.

Методика проведення FISH діагностики сперматозоїдів в клініці IVMED

Етапи дослідження:

1 – підготовка препаратів проводиться після отримання еякуляту, включає відбір сперматозоїдів, їх фіксацію і деконденсація хроматину

2 – предгібрідізаціонная підготовка препарату і нанесення проб CEP 18 / X / Y і LSI 13/21 на орпделенние зони гібридизації

3 – гібридизація з подальшою постгібрідізаціонной обробкою і детекцией флуоресцентних сигналів під флуоресцентним мікроскопом, який обладнаний набором спеціальних фільтрів.

Для виявлення рівня хромосомних аномалій в чоловічих статевих клітинах в клініці IVMED проводиться аналіз

1000 клітин

(сперматозоїдів)

Використовуються набори ДНК-зондів

Cytocell, Prenatal Enumeration Kit

1%

допустимий рівень анеуплоїдії в спермі за рекомендаціями Європейської асоціації урологів

показники вище 1% є відхиленням від нормальних значень

Анеуплоідії

Чисельні зміни хромосомного набору, які можуть бути виявлені при FISH аналізі сперматозоїдів:

• нулісомія – відсутність однієї з хромосом
• дисомія наявність двох однакових хромосом.

Найбільш часто зустрічаються види анеуплоїдій при FISH аналізі сперми:

• дві 18-х хромосоми в наявності
• подвійні Х-хромосоми
• одна з статевих хромосом відсутня.

Хромосомний набір сперматозоїда

Ядро сперматозоїда містить 22 аутосоми і 1 статеву (Х або У) всього 23 хромосоми

Гаплоїдний (одинарний) набір хромосом є відмінною рисою саме статевих клітин ооцита і сперматозоїда

У процесі запліднення генетичний матеріал яйцеклітини (23 хромосоми) з’єднується з генетичним матеріалом сперматозоїдів (23 хромосоми).

Зигота, яка виходить в процесі злиття статевих клітин, має повноцінний (диплоїдний) набір хромосом, в кількості 46.

Статеві клітини (гамети) містять по одній копії статевих хромосом:

• яйцеклітина в нормі містить тільки одну копію хромосоми Х.
• сперматозоїд може нести або Х, або У хромосому.

FISH (флуоресцентна in situ гібридизація)

молекулярно-цитогенетичний метод, за допомогою якого ідентифікується конкретна хромосома або частина хромосоми в досліджуваному матеріалі.

FISH дозволяє аналізувати хромосомні аномалії в ядрах не тільки клітин, що знаходяться на стадії метафази, але і інтерфазних соматичних і статевих клітин (сперматозоїдах).

13, 18, 21, X і Y хромосоми

досліджуються при проведенні FISH аналізі сперми