Принцип FISH методу (флуоресцентної гібридизації in situ)
- використовуються короткі послідовності ДНК, звані зондами, які є комплементарними по відношенню до послідовностей ДНК, що представляє об’єкт вивчення
- зонди зв’язуються з комплементарними ділянками ДНК і завдяки тому, що вони позначені флуоресцентною міткою, дозволяють визначити наявність (кількість) хромосом / ділянок конкретних хромосом.
На відміну від інших методів вивчення хромосом, які потребують ділення клітини, FISH можна виконувати на інтерфазних ядрах, завдяки чому досягається гнучкість методу.
При проведенні FISH аналізу сперми використовуються ДНК-зонди:
- локус-специфічні – дозволяють ідентифікувати певні ділянки конкретної хромосоми,
- центромерного – специфічно зв’язуються з альфасателітнимі ділянками досліджуваних хромосом.
Методика проведення FISH діагностики сперматозоїдів в клініці IVMED
Етапи дослідження:
1 – підготовка препаратів проводиться після отримання еякуляту, включає відбір сперматозоїдів, їх фіксацію і деконденсація хроматину
2 – предгібрідізаціонная підготовка препарату і нанесення проб CEP 18 / X / Y і LSI 13/21 на орпделенние зони гібридизації
3 – гібридизація з подальшою постгібрідізаціонной обробкою і детекцией флуоресцентних сигналів під флуоресцентним мікроскопом, який обладнаний набором спеціальних фільтрів.
Для виявлення рівня хромосомних аномалій в чоловічих статевих клітинах в клініці IVMED проводиться аналіз
1000 клітин
(сперматозоїдів)
Використовуються набори ДНК-зондів
Cytocell, Prenatal Enumeration Kit
1%
допустимий рівень анеуплоїдії в спермі за рекомендаціями Європейської асоціації урологів
показники вище 1% є відхиленням від нормальних значень
Анеуплоідії
Чисельні зміни хромосомного набору, які можуть бути виявлені при FISH аналізі сперматозоїдів:
- нулісомія – відсутність однієї з хромосом
- дисомія наявність двох однакових хромосом.
Найбільш часто зустрічаються види анеуплоїдій при FISH аналізі сперми:
- дві 18-х хромосоми в наявності
- подвійні Х-хромосоми
- одна з статевих хромосом відсутня.
Хромосомний набір сперматозоїда
Ядро сперматозоїда містить 22 аутосоми і 1 статеву (Х або У) всього 23 хромосоми
Гаплоїдний (одинарний) набір хромосом є відмінною рисою саме статевих клітин ооцита і сперматозоїда
У процесі запліднення генетичний матеріал яйцеклітини (23 хромосоми) з’єднується з генетичним матеріалом сперматозоїдів (23 хромосоми).
Зигота, яка виходить в процесі злиття статевих клітин, має повноцінний (диплоїдний) набір хромосом, в кількості 46.
Статеві клітини (гамети) містять по одній копії статевих хромосом:
- яйцеклітина в нормі містить тільки одну копію хромосоми Х.
- сперматозоїд може нести або Х, або У хромосому.
FISH (флуоресцентна in situ гібридизація)
молекулярно-цитогенетичний метод, за допомогою якого ідентифікується конкретна хромосома або частина хромосоми в досліджуваному матеріалі.
FISH дозволяє аналізувати хромосомні аномалії в ядрах не тільки клітин, що знаходяться на стадії метафази, але і інтерфазних соматичних і статевих клітин (сперматозоїдах).
13, 18, 21, X і Y хромосоми
досліджуються при проведенні FISH аналізі сперми
